间质-上皮细胞转化因子（MET）被认为是继表皮生长因子受体（EGFR）、间变性淋巴瘤激酶（ALK）之后又一重要的非小细胞肺癌（NSCLC）分子治疗靶点¹。NSCLC中MET异常（MET alteration）包括MET基因第14号外显子跳跃突变（MET 14跳突）、MET基因扩增、MET基因点突变（主要是激酶区突变）、MET基因融合及MET蛋白过表达等。准确检测MET异常是实施MET抑制剂治疗的前提²。MET异常形式和检测方法多，选择准确、快速、恰当的检测方法，全面筛选出适用靶向和免疫药物的目标人群具有重要临床意义³，本文针对MET 14跳突的临床意义及检测方法进行介绍。

NSCLC患者中MET 14跳突的发生率为0.9%~4.0%，MET 14跳突是晚期NSCLC的驱动基因突变之一，是筛选MET抑制剂靶向治疗获益人群的重要分子标志物。MET蛋白可通过Casitas B系淋巴瘤（CBL）E3泛素连接酶介导的泛素化降解进行负向调控。MET基因第14号外显子编码的近膜结构域中包含CBL结合位点（Y1003），是MET蛋白负向调控的重要区域。CBL与Y1003结合并介导MET蛋白泛素化，从而导致MET蛋白降解。MET 14跳突造成的MET蛋白近膜结构域缺失、Y1003位置氨基酸改变或缺失等变异形式均可导致MET蛋白泛素化障碍、MET稳定性增加和降解减少，从而引起下游信号的持续激活²。

目前已报道的MET 14跳突主要发生区域包括分支位点（branch site，单核苷酸）区域、多嘧啶区域（poly-pyrimidine tract，16个核苷酸）、剪接受体位点（splice acceptor site，上游2个核苷酸）以及剪接供体位点（splice donor site，下游2个核苷酸）（如图1）。当以上区域发生突变时，将导致mRNA异常剪接，表现为MET第14号外显子区域丢失，第13与15号外显子发生融合。MET 14跳突常见的突变位点分布区域较广，且突变形式多样，是临床检测和判读中面临的挑战²。

图1. MET第14号外显子跳跃突变主要分布区域

MET 14跳突的检测方法主要包括定量逆转录聚合酶链反应（reverse transcription quantitative-polymerase chain reaction，RT-qPCR）、DNA二代测序（next generation sequencing，NGS）和RNA二代测序等，不同检测方法各有其优缺点，必要时可相互验证或补充（如表1）。

以RNA为检测对象，在MET第13和第15号外显子区域设计引物，检测是否有特异性的扩增产物，该方法检测MET 14跳突准确率高，但对于一些与MET 14跳突功能相似的、特殊且罕见的MET变异形式，如Y1003位点氨基酸改变（约占总体阳性的2%）或缺失，会导致漏检。对于检测结果在阳性阈值附近的患者，其结果解释需谨慎，应结合样本质量、肿瘤细胞含量以及检测质控情况综合分析。必要时可使用其他平台进行复测²。

特点：能够较准确快速地探测到MET 14跳突的存在，兼具敏感性和特异性，检测周期短，适用于组织及细胞学样本³。

优选肿瘤组织样本或细胞学样本进行检测，目前试剂盒主要基于2种建库方法，扩增子法和杂交捕获法，富集MET 14跳突相关区域片段以进行基因序列检测。考虑到导致MET 14跳突的变异位点和形式多样性，不同建库方法的检测能力也有一定差别，推荐建库的靶向序列至少应覆盖全部MET 13内含子、MET 14外显子以及MET 14外显子下游50 bp的范围（MET 14内含子内）。二代测序生物信息分析的数据库应尽可能包含全面的MET 14跳突位点信息，并定期更新。部分以DNA为基础的NGS探针难以同时覆盖14号外显子两端的广泛位点基于DNA的检测可能存在漏检（如图2）⁴。对于检测到的疑似MET 14跳突，在生物信息分析预测的基础上，建议辅以RT-qPCR或RNA测序验证。DNA二代测序平台在基于上述因素的充分优化后，也能达到较高的灵敏度与特异度。当肿瘤组织样本和细胞学样本不可及时，可考虑液体活检样本进行DNA二代测序检测。ctDNA在肿瘤患者体内含量较低，对检测方法灵敏度的要求较高，可能存在假阴性；ctDNA检测也同样会受到检测探针覆盖的影响。因此，在使用液体样本检测时，需充分考虑这些局限性，当出现阴性结果时，应注明假阴性的可能性²。

特点：可在DNA层面直接鉴定出MET 14外显子区域碱基对突变的具体情况，是目前检测MET 14外显子跳跃突变最常用的手段，但检出率会受到引物设计或探针覆盖及生物信息分析能力的影响，且周期相对较长，优选肿瘤组织或细胞学样本，当上述样本无法获得时，也可考虑液体活检样本³。

图2. 基于DNA及RNA检测的对比

在RNA水平上检测MET第13/15号外显子融合来判断是否发生MET 14跳突。该方法直接检测MET 14跳突，检测覆盖范围明确，生物信息分析简单。尤其当患者发生影响剪接的非典型内含子突变时，该方法有助于识别MET 14跳突。但与RT-qPCR一样，对于一些罕见的MET变异形式（如Y1003位点氨基酸改变或缺失）可能会出现漏检。RNA二代测序同样对样本质量要求高，检测全程需做好质控²。

特点：在RNA水平上检测MET 13/15外显子融合来判断是否发生MET 14跳突，即使肿瘤细胞数量较少的样本，也可保持较高感性³。